武汉大学学报(医学版)

2017, v.38(05) 694-698

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慢病毒载体表达小鼠LAL对肝细胞的作用
Effects of Mouse Lysosomal Acid Lipase Overexpression Using Letivirus Vector on Hepatocytes

李皓;李菲菲;李文婧;曹佳;喻红;吴东方;

摘要(Abstract):

目的:为探讨溶酶体酸脂酶(LAL)在代谢性疾病的功能及作用机制,本实验构建小鼠源性LAL基因的慢病毒表达载体,并研究LAL在肝细胞中高表达的作用。方法:根据C57BL/6J小鼠肝脏cDNA文库设计对应引物,定点诱变PCR扩增得到两端含PacⅠ酶切位点的目的基因,经酶切连接至pWPI-GFP慢病毒载体后筛选并测序鉴定。重组载体经Lipofectamine 2000瞬时转染至小鼠Hepa 1-6肝癌细胞系,荧光显微镜观察GFP表达反映转染效率,利用30μg/ml氧化的LDL(ox-LDL)孵育细胞8h作为氧化应激条件,实时定量PCR(qPCR)检测目的基因LAL及肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)等基因的mRNA水平。结果:所构建的pWPI-LAL慢病毒表达载体序列正确,瞬时转染Hepa 1-6细胞有效升高LAL的mRNA表达水平;与基础及氧化刺激下的对照组相比,LAL表达均显著降低炎症相关基因TNFα、IL-6的mRNA水平(P<0.01)。结论:成功构建的pWPI-LAL慢病毒载体可在肝细胞内有效表达,并发挥抗炎作用。

关键词(KeyWords): 溶酶体酸脂酶;;慢病毒载体;;肝细胞;;肿瘤坏死因子α;;白细胞介素-6

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(编号:81570417,81670423)

作者(Author): 李皓;李菲菲;李文婧;曹佳;喻红;吴东方;

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